Представлены данные о распределении в 15 мировых популяциях частот аллелей семи маркёров в генах, участвующих в клеточном иммунном ответе на паразитарные инфекции, поляризации иммунного ответа по Th2-пути и ассоциированных с атопическими и аллергическими фенотипами. Гены и популяции для исследования были выбраны исходя из гипотезы о сдвиге баланса иммунного ответа от Th2 к Th1-типу по мере расселения современного человека из экваториальной Африки в регионы с умеренным и арктическим климатом под действием естественного отбора, обеспечивающего адаптацию популяций к новым условиям среды обитания. В настоящем исследовании выявлено систематические изменение частот аллелей, играющих роль в иммунном ответе и в воспалительных реакциях, в популяциях человека по мере расселения из Африки. Показано, что эти изменения связаны со сменой климато-географических условий среды обитания, опосредованы естественным отбором, имеют отношение к подверженности распространённым болезням, и могут быть объяснены с позиций гипотезы канализации/деканализации взаимоотношений генотип-среда под действием естественного отбора.

Лизосомные болезни накопления относятся к врождённым нарушениям обмена. Несмотря на относительную редкость отдельных нозологических форм, более 50 различных лизосомных болезней накопления проявляются в неонатальный период и они должны быть учтены при дифференциальной диагностике патологических состояний новорождённых. В статье рассмотрены ранние клинические проявления лизосомных болезней накопления. Знание этих признаков может помочь уменьшить ошибки диагностики, содействовать раннему выявлению и назначению специальной терапии.

У больных с протезированными клапанами сердца г.Кемерова оценены частоты аллельных вариантов (SNP) генов CYP2C9 (rs1799853, rs1057910) и VKORC1 (rs9923231) методом TaqMan-генотипирования. Было показано, что в группе больных наблюдается отклонение от равновесия Харди-Вайнберга для rs1799853 гена CYP2C9 вследствие избытка гетерозигот СТ и отсутствия гомозигот по мутантному аллелю, ассоциированному со сниженной активностью фермента. В целом, частоты аллелей и генотипов по всем изученным полиморфным вариантам находятся в пределах величин, характерных для популяций европеоидного происхождения и больных с сердечно-сосудистой патологией, принимающих антикоагулянты. Все изученные SNP статистически значимо связаны с индивидуальной терапевтической дозой варфарина. Однако наиболее существенное значение при назначении антикоагулянтной терапии имеет определение SNP rs9923231 гена VKORC1, поскольку наблюдаются наибольшие различия в необходимой терапевтической дозе варфарина между носителями различных генотипов (АА - 3,61 мг, AG - 4,25 мг, GG - 5,94 мг (р = 9,7е-16)).

В двух сибирских популяциях (русские и тувинцы) проведено изучение генов IL12B, IL12RB1, IFNGR1, IFNGR2, STAT1, IKBKG, приводящих к развитию «синдрома атипичных семейных микобактериозов» (MIM 209950). При исследовании распространённости 12 наиболее часто встречающихся мутаций генов установлен мономорфизм по аллелям «дикого типа». Методом секвенирования генов мутации, приводящие к развитию синдрома менделирующей подверженности микобактерийным заболеваниям (МПМЗ), также не выявлены, однако идентифицированы 15 известных ранее полиморфных вариантов. При поиске ассоциаций этих вариантов с туберкулёзом (ТБ) в исследуемых популяциях методом «случай-контроль» впервые обнаружена связь полиморфизма rs2066797 гена STAT1 с заболеванием (р = 0,02).

Проведён анализ связи полиморфизма генов, участвующих в регуляции Th1- и Th2-профиля иммунного ответа, с бронхиальной астмой (БА) и туберкулёзом (ТБ). Полиморфные варианты rs12756687 гена PIAS3 и rs6737848 гена SOCS5 ассоциированы с развитием БА, а rs3760903 гена PIASY ассоциирован с развитием ТБ. Обнаружена разнонаправленная ассоциация полиморфизма rs2069705 гена IFNG в отношении изученных заболеваний: гетерозиготный генотип ассоциирован с БА, в то время как гомозиготный генотип CC этого гена оказывает протективный эффект в отношении риска ТБ. Специфичность полученных ассоциаций может рассматриваться как фактор, способствующий редкому сочетанию двух иммунологически «полярных» заболеваний.

В первом триместре 15—20% клинически распознаваемых беременностей заканчиваются спонтанными абортами, причиной которых в половине случаев являются хромосомные аномалии у эмбриона. Выявление таких аномалий помогает оценить повторный риск при будущих беременностях. Однако кариотип эмбриона зачастую не может быть установлен методом стандартного цитогенетического анализа вследствие неудач культивирования или контаминации культур клетками материнского происхождения, а также при наличии субмикроскопических перестроек. Матричная сравнительная геномная гибридизация (aCGH) позволяет преодолеть эти ограничения и установить с высоким разрешением реальный хромосомный статус плода. Кроме того, эта технология даёт возможность исследовать вариации крупных блоков повторов (CNV) с целью поиска вариантов, связанных с невынашиванием беременности. В конечном итоге, это поможет выявить гены, нарушения в которых приводят к остановке эмбрионального развития.

The methylation profiles of the placental tissues of human embryos with normal karyotype and trisomy 16 were compared using an Infinium HumanMethylation27 BeadChip array (Illumina, United States). Numerous differences between the extraembryonic tissues with diploid and aneuploid karyotypes were observed. The extraembryonic mesoderm of embryos with trisomy 16 appeared to be less methylated than the diploid tissue, whereas the cytotrophoblast of aneuploid embryos was hypermethylated. The presence of the supernumerary chromosome was shown to influence the epigenetic profile of the genome by changing the level of methylation of CpG sites of all chromosomes. However, the largest number of differentially methylated loci was found on chromosome 16. Furthermore, more often, the epimutations were tissuespecific. In both tissues, the hypomethylated genes belong to the groups of genes responsible for different metabolic processes, whereas the hypermethylated genes control the processes of development, cell adhesion, immune response, and response to stimulus.

Сравнение профиля метилирования ДНК в плацентарных тканях эмбрионов с нормальным кариотипом и эмбрионов с трисомией хромосомы 16, выполненное с использованием платформы “Infinium HumanMethylation27 BeadChip” (“Illumina”, США), выявило существование множественных различий между внезародышевыми тканями с диплоидным и анеуплоидным кариотипом. Показано, что во внезародышевой мезодерме эмбрионов с трисомией 16 ДНК менее метилирована, чем у зародышей с нормальным кариотипом, тогда как в цитотрофобласте ДНК гиперметилирована. Присутствие дополнительной хромосомы влияет на эпигенетический профиль генома, изменяя уровни метилирования CpG-сайтов на всех хромосомах, при этом наибольшее число дифференциально метилированных локусов находится на самой хромосоме 16. Эпимутации в большинстве случаев тканеспецифичны. Гипометилированные гены в обеих тканях относятся к группам генов, ответственных за различные метаболические процессы, тогда как гиперметилированные отвечают за развитие, адгезию клеток, иммунный ответ и ответ на стимул.

For the first time, the epigenetic status of breast benign proliferative processes, malignant breast tumors, and metastases to regional lymph nodes has been studied using the GoldenGate Cancer Panel I DNA methylation microarray (Illumina, United States). The functional groups of differentially methylated genes were identified in each set of samples. The aberrant methylation of genes that regulate cell proliferation and mobility was found in the samples of benign proliferative breast processes. The aberrant methylation of genes responsible for cell differentiation and proliferation, as well as protein phosphorylation and cell mobility, was observed in the samples of malignant breast tumors. The differential methylation of the genes that regulate cell adhesion, the formation of anatomical structures, angiogenesis, immune response, signal transduction, and protein phosphorylation were found in samples with metastases to regional lymph nodes compared to the unaltered breast epithelium. It was found that tissues that range from benign proliferative processes and metastases to regional lymph nodes were generally characterized by a relatively lower level of epigenetic variability compared to the tissues of the primary tumor.

Впервые в сравнительном аспекте изучен эпигенетический статус доброкачественных пролиферативных процессов, злокачественных новообразований молочной железы и метастазов в регионарные лимфатические узлы (РЛУ) с помощью метилочипа “GoldenGate Cancer Panel I” (“Illumina”, США). В каждой исследованной выборке выявлены дифференциально метилированные функциональные группы генов. При доброкачественных пролиферативных процессах аномалии метилирования обнаружены в генах, регулирующих клеточную пролиферацию и мобильность. В образцах ткани со злокачественным фенотипом аномальное метилирование наблюдали в генах, ответственных за клеточную дифференцировку и пролиферацию, а также за фосфорилирование белков и мобильность клеток. В образцах тканей с метастазами в РЛУ дифференциальное метилирование по отношению к неизмененному эпителию молочной железы выявлено в генах, регулирующих адгезию клеток, формирование анатомических структур, неоангиогенез, иммунный ответ, трансдукцию сигналов и фосфорилирование белков. Установлено, что ткани с доброкачественными пролиферативными процессами и метастазами в РЛУ, в целом, характеризуются относительно низким уровнем эпигенетической вариабельности по сравнению с тканями первичной опухоли.

A biological microchip (biochip) has been developed to study the genetic predisposition to sporadic form of Alzheimer’s disease (AD). The biochip allows of genotyping of ten genetic polymorphisms within APOE, TOMM40, APOJ, EXOC3L2, GAB2, A2M, CR1, BIN1, and PICALM genes. The assay includes the amplification of the loci of interest and subsequent allele-specific hybridization of the fluorescently labeled amplicons with oligonucleotides immobilized on the biochip. The genotyping of 166 patients and 128 controls revealed a significant association of APOE allele ɛ4 with susceptibility to AD (OR = 2.275, 95% CI 1.045–4.954, p = 0.034). Protective effects were observed for APOE allele ɛ2 and CLU (rs11136000) allele T (OR = 0.215, 59% CI 0.090–0.516, p = 0.001 and OR = 0.679, 95% CI 0.47–0.99, p = 0.042, respectively). A gene-gene interaction analysis revealed two AD-associated genotype combinations, APOE ɛ3/ɛ4 GAB2 G/G (OR = 2.49, 95% CI 1.43–4.32, p = 0.001) and APOE ɛ4/ɛ4 GAB2 G/G (OR = 3.55, 95% CI 1.23–10.24, p = 0.015). Based on the results of the combined multivariate analysis, an algorithm was developed to identify the individuals having a higher risk of AD.

Разработан биологический микрочип (биочип), предназначенный для изучения наследственной предрасположенности к спорадической форме болезни Альцгеймера. Биочип способен определять 10 полиморфных маркеров в генах APOE, TOMM40, APOJ, EXOC3L2, GAB2, A2M, CR1, BIN1 и PICALM. Процедура генотипирования включает амплификацию нуклеотидных последовательностей выбранных генов и последующую гибридизацию флуоресцентно меченных участков с аллель-специфичными ДНК-зондами, иммобилизованными на биочипе. Проведено генотипирование 166 и 128 образцов ДНК индивидов с болезнью Альцгеймера и здоровых доноров соответственно, определены частоты аллелей и генотипов. Выявлена ассоциация аллеля 4 гена APOE с риском развития болезни Альцгеймера (OR = 2.275, 95% CI = 1.045–4.954, p = 0.034). Показана протективная роль аллеля 2 гена APOE и аллеля T (rs11136000) гена CLU (OR = 0.215, 95% CI = = 0.090–0.516, p = 0.001 и OR = 0.679, 95% CI = 0.47–0.99, p = 0.042 соответственно). В результате анализа межгенных взаимодействий обнаружены две комбинации генотипов, ассоциированные с риском развития болезни Альцгеймера: APOE 3/ 4 GAB2 G/G (OR = 2.49, CI = 1.43–4.32, p = 0.001) и APOE 4/ 4 GAB2 G/G (OR = 3.55, CI = 1.23–10.24, p = 0.015). По данным комбинированного многофакторного анализа разработан алгоритм выявления индивидов, у которых повышен риск развития болезни Альцгеймера.

Single-nucleotide polymorphisms (SNPs) are the most common type of genetic polymorphisms. Despite the progress in sequencing and postgenomic technologies, targeted SNP genotyping continues to be in highest demand in the approach to human and medical genetics. In this work, we describe the application of multiple SNP genotyping by MALDI-TOF mass spectrometry for analysis of genetic diversity of immune response genes in human populations. It was shown that MALDI-TOF mass spectrometry is a rapid, accurate, and efficient method of medium-scale SNP genotyping. Allele frequencies of 56 SNPs in 41 genes implicated in the regulation of immune response were similar in four populations studied (Russians, Komi, Khanty, and Buryats). These populations had similar levels of genetic diversity and were clustered according to their geographic location. The cost efficiency of MALDI-TOF mass spectrometry was evaluated compared to real-time PCR technology.

Однонуклеотидные полиморфные маркеры (SNP) – наиболее распространенный тип генетического полиморфизма. Несмотря на прогресс в технологиях секвенирования и постгеномных технологиях, точечное генотипирование SNP остается самым востребованным подходом в генетике человека и медицинской генетике. В работе описан опыт применения мультиплексного генотипирования SNP с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF для анализа генетического разнообразия генов иммунного ответа в популяциях человека. Показано, что масс-спектрометрия MALDI-TOF – это быстрый, точный и эффективный метод для среднемасштабного генотипирования SNP. В четырех исследованных российских популяциях (русские, коми, ханты и буряты) выявлен близкий спектр аллельных частот 56 SNP в 41 гене, продукты которых участвуют в регуляции иммунного ответа. В изученных популяциях зафиксирован сходный уровень генетического разнообразия и обнаружена кластеризация популяций в соответствии с их географической локализацией. Оценена экономическая эффективность генотипирования с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF в сравнении с технологией ПЦР в реальном времени.

The calcineurin signaling pathway plays a crucial role in the heart remodeling of a different nature, in the development of left ventricular dilatation, and in the progression of heart failure. Components of the calcineurin pathway are involved in the regulation of cardiomyocyte hypertrophy, angiogenesis, and apoptosis. In this study, quantitative expression profiles were determined for major calcineurin pathway genes PPP3CA, PPP3R1, PPP3CB, GATA4, and NFATC4 in the myocardium of the right atrium auricle in patients with ischemic heart disease who underwent different types of surgery depending on the severity of clinical symptoms as follows: surgical reconstruction of left ventricle (LV) geometry (post-infarction aneurysm) or coronary artery bypass grafting (unaltered LV morphology). In patients with sizable post-infarction LV dilatation (n = 21), the expression levels of calcineurin catalytic subunit genes PPP3CA and PPP3CB were 1.3 and 1.6 times lower (p = 0.018 and 0.023, respectively) than in patients with unaltered heart shape (n = 34). The differences in expression levels of PPP3R1, which encodes calcineurin regulatory subunit B and levels of GATA4 and NFATC4, which encode transcription factors, were not significant. Thus, decreased PPP3CA and PPP3CB expression in the atrial myocardium may be a marker of significant post-infarction LV remodeling. The further investigation of the relationship between expression levels of calcineurin pathway genes and the degree of myocardial damage may provide useful insights for predicting adverse events in cardiosurgical treatment of patients with post-infarction heart remodeling.